胆酸在肝硬化术后肝脏功能影响的试验研究- 新闻详情：
胆酸在肝硬化术后肝脏功能影响的试验研究
目的：探讨胆酸对肝硬化大鼠肝切除术后肝脏功能的影响
我国肝癌患者80%以上合并有肝硬化，而硬化肝肝切除术后的再生能力明显下降，肝切除后面临残余肝脏功能的代偿问题，如何避免硬化肝肝切除术后肝功能衰竭的发生，促进肝功能的恢复和加快肝再生，一直是研究的热点。含0.2%胆酸的饲料饲养正常大鼠，可以促进大鼠肝再生，进一步研究发现，核受体依赖的胆汁酸信号对正常肝再生是必需的．胆汁酸水平升高加速肝再生，胆汁酸水平降低和缺失胆汁酸受体一样抑制肝再生。
本研究给大鼠饲料中添加胆酸，观察胆酸对肝硬化大鼠肝切除术后肝脏功能的影响。
材料与方法：
动物模型制备与分组
24只清洁级Wistar大鼠，雄性，6周龄，体重110-200 9，广州医学院实验动物中心提供。动物食用标准饲料，保持12 h光照的昼夜周期，室温控制在18-25C，湿度为60%-70%。雄性Wistar大鼠饮用0.03%硫代乙酰胺(thioacetamide，TAA)溶液、自由进食12周来制备肝硬化模型[2]．复制肝硬化模型大鼠24只．大鼠造模结束后恢复饮用自来水2周行肝叶切除术，手术方法参照Higgins创建的肝叶切除术，3_1：腹腔注射1%戊巴比妥35mg/kg麻醉后，正中切口进腹，以3/0丝线结扎肝左、中叶根部，行左、中叶肝脏切除术，切除的肝叶约占全肝的68%。24只肝硬化大鼠肝叶切除术后随机分为胆酸组和对照组喂养1周．每组12只．对照组给以标准饲料喂养，胆酸组给以含0.2%胆酸(cholicacid，Sigma产品)的饲料喂养。大鼠均自由摄食饮水。
标本收集：
治疗1周后，大鼠禁食1夜．腹腔注射1%戊巴比妥35 mg/kg麻醉后，正中切口进腹，在十二指肠降部肠系膜处分离胆总管并结扎．向肝脏方向插入带引流管的针头．收集胆汁30 min以测定胆汁分泌的速度，并用于胆汁中总胆汁酸( totalbile acids ,TBA)测定。随后暴露下腔静脉，抽取下腔静脉血液4 ml,备送肝功能检查。随后迅速取残肝组织．置10%福尔马林液中固定．制成石蜡切片，做普通染色、Feulgen染色及免疫组织化学染色备检。
检测指标及测定方法
①全自动生化分析仪测定血清谷草转氨酶(AST)、谷丙转氨酶(ALT)、白蛋白(ALB)含量和胆汁TBA含量。②肝细胞有丝分裂指数(mitoticindex，MI)：普通病理切片常规染色后，计数1000个肝细胞中有丝分裂肝细胞数目，换成百分比。③肝细胞增殖细胞核抗原（proliferating cell nuclearantigen，PCNA）：石蜡切片经脱蜡水化后，以磷酸盐缓冲液(PBS)冲洗，加10%正常羊血清封闭，顺序加一抗、二抗、三抗，继之以磷酸盐缓冲液(PBS)冲洗，以联苯二氧胺(DAB)显色，甲基绿复染。胞核显示棕褐色为PCNA阳性。PCNA标记指数以随机选择高倍视野中至少1000个细胞，计数的PCNA阳性核的百分数来表示f阳性核数目／计数的肝细胞总数×100%）。④细胞核DNA含量测定：BX51型全自动图像分析系统测定Feulgen染色中肝细胞核DNA含量．
统计学处理：
数据用x+s表示．采用SPSSIO.O统计软件进行f检验。
结 果：
肝脏病理组织学检查的变化
所有模型组大鼠肉眼可见肝硬度增加．表面呈颗粒状．HE染色镜下见正常肝小叶结构被破坏，纤维组织广泛增生，形成假小叶。通过肉眼及镜下观察认为大鼠肝硬化模型建立成功。
肝硬化大鼠肝切除术后胆汁分泌速度及胆汁TBA含量
胆酸组胆汁分泌速度明显高于对照组(P<0.01)．且胆酸组胆汁TBA含量明显高于对照组
(P<0.01)，表明胆酸组大鼠胆汁酸代谢池增大。
肝功能检测结果
胆酸组血清AST含量明显低于对照组(P<0.01)，ALT含量明显低于对照组(P<0.01)，ALB含量明显高于对照组(P<0.01)。
肝再生指标检测结果
胆酸组有丝分裂指数(MI)明显高于对照组(P<0.01)，增殖细胞核抗原(PCNA)标记指数明显高于对照组(P<0.01)．细胞核DNA含量明显高于对照组(P<0.01)。
