牛磺胆酸钠的合成及镇咳、祛痰作用比较- 新闻详情：
牛磺胆酸钠的合成及镇咳、祛痰作用比较
李沙 石朝周
同济医科大学药学院药剂学教研室 武汉 430030
摘要：对6种不同的牛磺胆酸钠进行了合成，并对比其镇咳、祛痰作用。结果表明，相对于空白组它们均个有镇咳、祛痰作用，但两者强弱顺序不一致。前者为：牛磺鹅去氧胆酸钠＞牛磺猪去氧胆酸钠＞牛磺胆酸钠≥牛磺熊去氧胆酸钠＞牛磺蝰胆酸钠＞牛磺去氧胆酸钠；后者为：牛磺熊去氧胆酸钠＞牛磺鹅去氧胆酸钠＞牛磺胆酸钠≥牛磺去氧胆酸钠≥牛磺蝰胆酸钠＞牛磺猪去氧胆酸钠。结果提示：牛磺胆酸钠的镇咳、祛痰强度因羟基的位置与数目而异，其中7位具羟基作用较强。
关键词：牛磺胆酸钠，合成，镇咳，祛痰
从上世纪开始，胆汁及胆汁酸的研究一直是化学和医学领域中的一个热点。其研究重点已从初期的分离及结构鉴定转向药理作用的探索，但研究的对象主要是游离型胆汁酸。鉴于人类与动物胆汁中的胆汁酸多以结合型胆汁酸盐的形式存在，且以牛磺胆汁酸盐最为常见，本文合成纯化了6种主要的牛磺胆汁酸钠，并定性地探计了结构对其镇咳、祛痰的作用。
1、材料与方法
1.1 试剂设备及动物
牛磺酸,由武汉制药厂生产(纯度＞98%);石胆酸,由Fluka AG,Chim,Fabrik CH-9470 Buchs购得（纯度＞99%）；去氧胆酸，。由上海化学试剂站分装厂购得，Fluka进口分装（纯度≥99%0）；猪去氧胆酸，由武汉肉联厂提供，粗品；熊去氧胆酸，由江苏镇江生物化学制药厂生产，片剂；鹅去氧胆酸，由江苏高邮生物化学制药厂生产，胶囊；胆酸，由北京海淀区微生物培养厂生产；牛磺蝰胆酸钠，由本室制备并经结构鉴定确证；N-乙氧甲酰基本2-乙氧基本1，2-二氢喹啉（EEDQ），由本室合成并经结构鉴定确证；二甲基甲酰胺（DMF），分析纯（AR）；其它试剂均为AR级；柱层析用硅胶，200～300目，由青岛海洋化工厂生产。
X4溶点测量显微镜；Pe-983型红外光谱仪；VG-7070-HF型质蛮仪；APX-500型核算磁共振仪；751型紫外可见光光度计。
小白鼠，昆明种，购自同济医科大学实验动物学部，（20±2）g,雌雄各半。
1.2 牛磺胆汁酸钠的合成
按照Belleau(EEDQ)合成牛磺胆汁酸钠，合成路线如下：
取5mmoAl与7mmolEEDQ，用10ml DMF溶解，搅打冷战下向此溶液中依次加入5.5mmol与0.9ml三乙胺，反应混合物于900C搅拌回流1h后去热源，继续搅拌1h至室温。将反应液缓缓加入冰浴中的100ml冷乙醚中，边加边搅拌，将所得混悬液冷藏过夜 。过滤，沉淀用乙醚洗涤后溶于30ml二氯甲烷中，并滤除不溶物（未反应的牛磺酸）。在冰浴中，于搅拌下将澄清的滤液慢慢加入100乙醚后过滤。沉淀后用乙醚洗涤后溶于25ml0.2mol/L NaOH甲醇溶液中，搅拌下向其中加入乙醚，产生大量白色絮状沉淀，用乙醚洗涤后于真空干燥得白色粉末B（维4.65mmol，93%）。
以200～300目硅爱尔兰装柱，取2g粗品制样，将样品小心加于柱顶，以氯仿：甲醇：水（65：28：49）洗脱，得白色粉末状精品B。精制后收率分别为I与V为65%，其它均为50%。其m.p.分别为：I 178～180C；Ⅱ 207～209C；Ⅲ 198～200C；Ⅳ176～178C；Ⅴ194～196C。
将上述精制品B进行IR，13C-NMR及MS波谱分析，结果与文献报道一致。
1.3牛磺胆汁酸钠镇咳、祛痰作用的药效试验
1.3.1供试液：空白对照液：生理盐水。样品液：Ⅱ0.0149mmol/ml;其它均为0.0298mmlo/ml。
1.3.2镇咳作用：选取健康小白鼠70只，体重（20±2）g，雌雄各半，随机分为7组，每组10只。将小鼠放入上县有棉球的500ml钟罩内，向棉球注入氨水（25%～28%）1 ml,2mim后立即取出小鼠，置烧杯中观察。以小鼠腹肌收缩及张口为咳嗽指标，记录1 mim内咳嗽次数（无咳嗽次数或咳嗽次数少于30次者为不敏感，弃之并予以补充）。此后立即将每组小鼠分别用空白对照液或一种样品液灌胃，剂量分别为：Ⅱ1.0ml/只，其余均为0.5ml/只。1h后依前法给以氨水刺激，记录给药后的咳嗽次数，并以减咳率来反映镇咳效果。
给药前咳嗽次数，减去给药后咳嗽次数，除以给药前咳嗽次数，等于减咳率。
1.3.3 祛痰作用：酚红标准曲线的绘制：精密称取酚红0.0918 g，以50g/L NaHCO3溶液溶解，移至1000ml的容量瓶中，加50g/L NaHCO3溶液至刻度定容，分别取此溶液0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0ml于10 ml容量瓶中，以50g/L NaHCO3溶液稀释至刻度。以50g/L NaHCO3溶液为空白，在751型紫外可见光光度计上于640nm处测定其吸收度（A）。小鼠气管酚红排泌量的测定：选取健康小白鼠70只，体重（20±2）g，雌雄各半，随机分为7组，每组10只。实验前先将小鼠禁食12h，然后将每组小鼠每组小鼠分别用空白对照液或一样品液灌胃，剂量为：Ⅱ1.0ml/只，其余均为0.5ml/只。给药0.5h后以0.5ml/只的量给小白鼠腹腔注射2.5 一/L酚红溶液，再过0.5h后使小鼠颈椎脱臼处死，仰立固定于木板上。切开颈正中皮肤找出气管，用6号针头从小鼠喉头刺入气管0.3cm，用线结扎避免针头滑脱，用1ml的注射器抽取0.5ml 50g/L NaHCO3溶液抽洗3次，将抽洗液注入小试管中并重复此操作4次。将5次抽先液混合，并用50g/L NaHCO3溶液稀释至3ml，以1500r/mim的速度离心5min。小心分取上清液，于540nm处以50g/L NaHCO3溶液为空白，在751型紫外可见分光光度计上测定A值，并用所得的酚红标准曲线求出小鼠的酚红排泌量。
2、结果
以生理盐水为空白对照液，小白鼠为实验动物，测得6种牛磺胆汁酸钠的外镇咳、祛痰作用的药效。
3、计论
胆汁酸是动物胆汁的主要成分，它们在胆汁中多与各种氨基酸以结合形式存在，最常见的为牛磺胆汁酸与苦氨胆汁酸，而在许多动物胆汁中又以牛磺胆酸更为多见,且它们大多为钠盐。虽然国内外许多文献报道过一些动物胆汁或结石中所含胆汁酸的组成及药理作用，介关于结合型胆汁酸的研究较游离型少。例如，有人已证实鹅去氧胆酸钠、猪去氧胆酸钠分别为鸡、猪胆汁的镇咳、祛痰活性成分，那么它们的牛磺酸结合物是否也有此效用呢？至今未见报道。本文合成了6种牛磺胆汁酸钠，并对其进行了镇咳、祛痰作用的药效学实验，结果表明对于空白对照组而言，这6种牛磺胆汁酸钠均具有镇、祛痰作用的生理活性，但强度不尽相同。实验结果还提示，甾环上具二个羟基的牛磺胆汁酸钠较三个羟基者镇咳作用更强，尤其是7位或6位碳原子上有羟基的牛磺胆酸钠；当分子中的羟基数目相等时，羟基所在位置不同，其镇咳作用有显著差异，且羟基在7α位者比7β位者作用强，但3位和7位碳原子上有羟基的二羟基牛磺胆汁酸钠仍显示较强的祛痰活性，且羟基处于7β位者的强度较7α位者大。
