4 天然熊胆和引流熊胆化学、药理的比较研究

　　　目前引流熊胆常用于代替天然熊胆使用, 但是二者究竟有多大的相似性, 有许多学者进行了比较研究。

4.1 化学成分的比较研究

4.1.1 胆汁酸的比较测定 梁凤锡采用薄层扫描法对天然熊胆和引流熊胆中熊去氧胆酸和鹅去氧胆酸作了比较测 定, 天 然熊 胆中 UDCA 均值为18.17±0.80% , CDCA 均值为 15.17±0.42% , 引流熊胆各均值分别为 17.7±4.18% 及 18.0±1.55% , 两类熊胆的UDCA 含量或 UDCA 与 CDCA 之和较为相近[ 31]。但这种方法须将样品水解后再进行薄层扫描测定, 操作繁琐, 且结合胆汁酸水解完全较难控制。目前广泛采用高效液相色谱法, 直接测定熊胆中牛磺熊去氧胆酸( TUCDA) 和牛磺鹅去氧胆酸( TCDCA ) 的含量, 这种方法无需复杂的样品前处理, 操作简单, 方法准确精密。张启明等用 HPLC 法直接测定了胆汁酸含量, 结果表明,引流熊胆中总胆汁酸含量与天然熊胆接近, 但TUDCA 含量比天然熊胆低, 而 TCDCA 高于天然熊胆,这与薄层扫描法的测定结果基本一致。

4.1.2 胆固醇的比较测定 用薄层扫描法测定两种

熊胆胆固醇的含量, 天然熊胆胆固醇含量一般为0.56% ~ 0.59% , 平均为 0.57% , 而引流熊胆一般为0157% ~ 0.72% , 平均为 0.64%, 较天然熊胆略高。

4.1.3 胆红素的比较测定 用重氮化分光光度法比

较分析了两类熊胆中胆红素的含量, 天然熊胆胆红素含量一般为0.396% ~ 0.40% , 平均为 0.4% , 引流熊胆一般为 0.188% ~ 0.253% , 平均为 0.20%, 表明天然熊胆含胆红素较引流熊胆为高。

4.1.4 氨基酸的比较测定 用氨基酸自动分析仪, 分析测定了两类熊胆的氨基酸, 结果两类熊胆样品的氨基酸种类近乎相同( 天然熊胆中未测得蛋氨酸) , 但含量差异较大, 天然熊胆以天门冬氨酸、谷氨酸、丝氨酸、苏氨酸含量较高, 而引流熊胆则以谷氨酸、天门冬氨酸、亮氨酸、赖氨酸含量较高[ 32]。

41115 微量元素的比较测定 用电感耦合氩等离子

体发射光谱仪测定了两类熊胆中微量元素, 结果在天然熊胆中测得 10 种无机元素, 引流熊胆中可测得 14种无机元素, 各种元素含量差异较大, 天然熊胆中以磷、钙、镁含量最高, 硼、铜、镨较高, 钡、钴、铬、锶、铍含量较低, 引流熊胆以磷、钙、镁含量最高, 铁、铝、铜、

镨含量较高, 钡、锰、锶、钴、硼、铬含量较低, 两种熊胆中均未发现有害元素。引熊胆中某些成分的含量受饲料组成、引流年限、引流时间等多种因素的影响,可能会造成和天然熊胆的差异, 这些有待于进一步的深入研究。

4.2 药理作用的比较研究

4.2.1 利胆、保肝、溶解胆石作用比较 梁凤锡通过胆道插管法测定大鼠给天然熊胆和引流熊胆后胆汁分泌量的变化差异来比较两种熊胆的利胆作用, 结果表明二者均能增加大鼠胆汁的流出量, 且胆汁中胆酸含量增加。离体及在体实验均证明熊胆对四氯化碳、D- 氨基半乳糖等化学物质所造成的急慢性肝损伤均有明显的保护作用。金香子通过细胞化学观察法比较了天然熊胆和引流熊胆对四氯化碳所致肝细胞损伤的保护作用的区别, 二者的作用强度较为相近。熊胆所含的多种胆汁酸, 如熊去氧胆酸、鹅去氧胆酸, 去氧胆酸等具有抑制胆石形成, 溶解胆石的作用。姜皓研究了天然熊胆和引流熊胆对豚鼠胆囊胆固醇结石的预防作用, 二者对结石呈现较为相拟的抑制率。

4.2.2 镇惊、解痉、镇静作用比较 李君实等比较了天然熊胆和引流熊胆对抗戊四氮所致惊厥的作用, 两种熊胆比较均有一定的抗惊厥作用, 但引流熊胆的低剂量组作用不显著。同时通过离体肠管试验法观察了相同剂量的两种熊胆对乙酰胆碱所致的强直性收缩的作用, 表明二者均有缓解强直性收缩作用。并通过比较两种熊胆对小鼠自主活动的影响, 与水合氯醛的协同作用, 对抗去氧麻黄碱的兴奋作用, 评价二者镇静作用的区别, 表明相同剂量的天然熊胆和引流熊胆, 对小鼠自主活动有抑制作用, 与水合氯醛有明显的协同作用, 对去氧麻黄碱有一定程度的对抗作用。

4.2.3 抗炎作用比较 李武军比较了两种熊胆对二甲苯所致小鼠耳部炎症的作用, 表明二者均有明显的作用, 且对炎症的抑制率也比较接近。

4.2.4 抑菌作用比较 天然熊胆和引流熊胆抑菌作用范围较广。对金黄色葡萄球菌的抑菌强度, 天然熊胆MIC 值为 0.625, 引流熊胆为 1.25, 天然熊胆抑菌力优于引流熊胆; 而对枯草芽孢杆菌的抑菌强度, 天然熊胆MIC 值为 2.5, 引流熊胆为 1.25, 引流熊胆的抑菌力优于天然熊胆, 对其它菌也呈现类似情况, 故认为二者抑菌力近似。

4.2.5 解热作用比较 吴明寿通过测定和计算注射内毒素后小鼠的肛温变化来比较两种熊胆的降温作用, 结果二者均有显著的降温作用, 作用十分相似。以上对天然熊胆和引流熊胆在化学成分和药理作用两个方面进行比较, 二者虽在某些方面具有一定的相似性, 但是从更广泛及某些独特方面引流熊胆与天然熊胆的差别有待于进一步深入研究。

5 熊胆的其它替代品研究

　　　在90 年代以前, 临床应用以天然熊胆为主。熊胆引流的成功为天然熊胆寻找了一个理想的替代品, 它不仅使野生熊资源得到了较好的保护, 而且也使临床需要得到了很大缓解, 较好地解决了中药材熊胆的药源问题, 但是引流取胆仍来自于熊体, 手术会对熊本身造成损害, 生产成本也较高, 为此许多学者从其他途径寻找熊胆的替代品。

5.1 人工合成 UDCA 是熊胆的特有成分。自 1954年提出合成以来, 于 80 年代已成功地进行工业合成。

5.2 生物合成 用真菌发酵法由石胆酸( LCA ) 和鹅去氧胆酸( CDCA) 制备熊去氧胆酸( UDCA) 。其中以LCA 为原料的制备方法产率较高, 副产品少, 很有发展前途。

5.3 其他动物胆 兔胆、猪胆、象胆等许多动物的胆与熊胆具有许多相似之处, 对熊胆与兔胆药理作用对比研究的较多。

5.3.1 熊胆与兔胆抗惊厥作用比较 小鼠腹腔分别注射 1%0.1ml/ 10g 的两种胆汁溶液, 结果表明兔胆作用与熊胆相近。顾贤臣用自动电惊厥仪进行了研究,熊胆作用略强于兔胆。

5.3.2 抗疲劳作用比较 两种胆汁溶液分别灌胃 7天, 熊胆作用强于兔胆, 呈显著性差异。

5. 3. 3 镇咳作用比较 以 0. 01% 兔胆溶液与 0. 1%熊胆溶液 0. 1ml/ 10g 分别腹腔注射, 结果兔胆作用强于熊胆, 达显著水平。顾贤臣的研究也显示相同的结论。

5. 3. 4 镇静作用比较 分别注射 1. 5mg/ 10g 兔胆和熊胆溶液 30min 后, 兔胆作用显著强于熊胆。

5. 3. 5 对心脏作用比较 以离体蟾蜍心脏为实验材料, 兔胆增加心肌收缩力和心输出量显著强于熊胆。

5. 3. 6 耐缺氧作用比较 分别用 116mg/ kg 熊胆和21mg/ kg 兔胆腹腔注射, 兔胆的作用仍显著强于熊胆。

5. 3. 7 其他作用比较 兔胆和熊胆均能对抗组胺对肠肌的兴奋作用; 且兔胆对离体肠肌作用较强； 两种胆对胃肠推动作用无差异。

6 展望

　　　引流熊胆成功给熊胆这一珍稀药材提供了丰富的药源, 随着人工引流熊胆技术的进一步科学化、规范化、标准化, 由外界因素造成熊胆粉质量的差异将会进一步缩小, 熊胆粉的质量将会进一步提高, 质控标准进一步完善, 从而使熊胆粉更大程度上地替代天然熊胆,减少猎熊及杀熊取胆对资源的危害。但如何进一步改进人工引流熊胆的技术和方法, 减少动物的痛苦, 将是保证引流熊胆能进一步扩大市场的关键。另一方面,对熊胆的药效进行再评价, 研究熊胆的特有疗效及其在中医方剂中的不可替代性, 是维持熊胆作为动物药使用的前提。为此, 对熊胆进行深入的本草研究, 挖掘熊胆的特有疗效, 并从相应的药效物质基础、质量评价及较深层次开发研究角度重新评价熊胆的工作将为近期熊胆研究的重点。